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猪人工授精最全步骤以及技术要点

猪巴巴 5个月前 738 0
人工授精实验室是很严谨的工作,必须是有据可依,不能单靠直觉和经验来判断。成功管理人工授精实验室,是猪巴巴不断追求的目标,本文涵盖了猪人工授精最全步骤以及技术要点。

人工授精

公猪的调教

公猪应该在8到10个月大的时候接受训练,大多数公猪可以适应假母台采精,训练的关键是耐心,根据经验,猪巴巴总结了公猪调教口诀。

公猪爬假母台
  1. 备制一个采精台,蒙上猪皮诱公来。
  2. 表面涂抹荷尔蒙,忽悠公猪爬上台。
  3. 不停呼喊上上上,多种刺激凑效快。
  4. 初配公猪不懂事,师傅可将徒弟带。
  5. 师傅公猪先示范,徒弟公猪隔栏看。
  6. 耐心训练三五次,训练成功即告完。
  7. 调教公猪重安全,两头公猪勿同栏。
  8. 采精处设逃逸口,公猪袭人由此穿。

技术要点:

公猪体型笨重,采精栏一定要铺采精防滑垫,防止公猪爬假母台时滑倒受伤。也可以配合使用公猪诱情剂,引诱公猪爬假母台。采精员区域一般比采精栏低一些,注意不要被公猪踩到手。

采精前实验室准备

磁力搅拌器
磁力搅拌器
  1. 采精准备很重要,有关器械把毒消。
  2. 稀释液配稍提前,静置一时缓冲要。
  3. 稀释浓度须准确,精液渗压恰正好。
  4. 冬天保温勿疏忽,冷击精子活不了。
恒温冰箱
恒温冰箱

技术要点:

蒸馏水和稀释粉的比例大约是1L:1包(50g),稀释用的水必须是灭菌后的蒸馏水(纯水)。

搅拌时间不少于30分钟,稀释液温度不得超过40℃,搅拌时防止落入杂物。按所需量稀释使用,防止浪费。

稀释后放入水浴锅或加热水槽加温,注意要防止水浴锅里水进入稀释液内,水浴锅的温度保持在35℃~38℃。

建议使用不锈钢的保温杯,不易摔坏,用橡皮圈将采精过滤纸扎在采精杯口。

采精前的保温杯必须保证38℃恒温加热,稀释时使用的容器同样需要38℃恒温加热。

开始给公猪采精

手动采精
徒手采精
  1. 公猪进得采精室,挤压包皮排积尿。
  2. 待猪爬上采精台,紧握阴茎莫放掉。
  3. 借助阴茎前挺力,顺势前伸茎固牢。
  4. 阴茎根部显露时,射精即要开始了。
  5. 集精杯口过滤布,囊液凝块过滤掉。
  6. 始出精液不可接,色清精少且混尿。
  7. 正常精液乳白色,此态精子密度高。
  8. 公猪射精两三次,两百毫升不为少。
猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第6张
自动采精系统

技术要点:

目前常见的采精方式有两种,一种是普通采精法,也就是手动采精,另一种则是先进的自动采精,不管是哪种采精方法,都要注意以下技术要点。

采精前要用手将公猪尿液排净(包皮积尿),刚开始射精时的胶状物也要排净。

使用的过滤纸一定不能有杀精成分,不可使用橡胶手套(橡胶有杀精成分)。

采精室温度最好在25℃以上,采精杯要加热到38℃左右,可以减少死精。

射精完全结束后才能松手,未排空的精液会影响下次采精的精液质量。(一般公猪的采精量在200ml,也有少数在500ml的)

射精包括四个阶段:初期精液期、富含精子期、后期精液期、凝胶部分。

初期和后期的精液不要采集,这两个阶段主要成分为血浆,外观呈透明到半透明状;富含精子期的成份外观为白色或米白色,是应该采集的精液;凝胶部分自始自终存在于整个射精过程。通过采精杯上的过滤纸可以将精液与凝胶分离。

第一阶段与第二节段变化明显,而第二与第三阶段是逐渐变化的,当射出的精液变成较白的米白色,就可以开始收集了。相反的,当精液开始出现水样时,停止收集将采精杯拿走。但一定要让公猪完成整个射精过程。

公猪精液检测评估和稀释

猪精子结构
猪精子结构

一次完整的采精射精量在200~500ml,精子密度大约2~3亿/ml,精子颜色乳白色或浅灰色,呈云雾状,略带腥味,PH值大约在7.0~7.8之间。

如何评估精子的质量?

猪的精子分头部、颈部和尾部三个主要部分,长度为50~60μm。

采精结束后,原精液应再次过滤杂质,经过天平称重,检测精液的PH值,然后可以通过精子密度仪来检测精子密度,最后通过显微镜观察来看精子活力和畸形率。

  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第8张
    电子显微镜
  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第9张
    精子活力图
  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第10张
    第一次稀释
  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第11张
    第二次稀释
精子形态评估
A.正常精子的形态1-3
B.异常精子的形态

4.窄头 5.头基部狭窄 6.梨形头 7.圆形头
8.巨头 9.小头 10.发育不全 11.偏轴

C.中段的形态

11.正常的中段 12.螺旋状中段 13.中段鞘膜脱落
14.假原生质滴 15.双中段

D.尾部的形态

16.近端原生质滴 17.远端原生质滴 18.单卷尾
19.尾多重卷曲 20.环形卷曲 21.无尾的头

精子形态图.jpg
精子形态对照图

技术要点

  1. 稀释用的器皿使用前须消毒,用少量稀释液冲洗一遍;
  2. 品质检查不合格(活率<0.7)的精液不能稀释;
  3. 精液采集后尽快稀释,原精贮存时间不宜超过30分钟;
  4. 稀释时严禁太阳光直射精液,应于较暗处操作;
  5. 精液要求等温稀释,以精液为标准,调节稀释液温度;
  6. 稀释顺序是稀释液沿杯壁加入到精液中,沿一个方向搅拌混匀;
  7. 高倍稀释时先进行低倍稀释,以防 “稀释打击”;
  8. 根据精液的品质、输精量和配种母猪头数来确定稀释液总量;
  9. 以每个输精剂量30亿/80~100ml来确定稀释倍数;
  10. 稀释后要求静置片刻再做精子活率检查;

精液稀释计算公式

制造精液瓶数公式:原精量*密度*活率*(1–畸形率)/容器规格=制造瓶数

制造稀释液使用量公式:制造瓶数*瓶装重量-原精量=所需稀释液量

例如:采精量:250ml,密度:300*106ml,活率:90%,畸形率:10%,瓶装精子含量(80ml/30亿),计算所需稀释液量和制造瓶数。

制造瓶数:250 * 3.5 * 0.9 * ( 1 - 0.1 ) / 30 ≈ 23瓶

所需稀释液量:20 * 80 – 250ml = 1598ml

稀释方法
区分采精量(稀释后精液量)所需稀释液量稀释温度变化
第一次稀释250ml(采精量)
250ml35℃~37℃
第二次稀释500ml
500ml33℃~35℃
第三次稀释1000ml848ml31℃~33℃
第四次稀释1848ml029℃~31℃
稀释完成1848ml025℃左右(实验室室温)
  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第13张
    反离子渗透纯水机
  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第14张
    纯水机结构图

精液灌装存储与运输

精液的灌装

稀释后精液的常见保存方法有三种:输精瓶、输精管和连续输精袋。其中最常用的是输精瓶,使用输精瓶分装的精液容易导致精子沉淀挤压而死,而扁平的精液管和连续输精袋可以更好的保存精液,其中连续输精袋是全自动精液灌装机必备的。

  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第15张
    第一代:输精瓶
  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第16张
    第二代:精液管
  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第17张
    第三代:连续精液袋

上面讲到的精液保存方式对应着三种常见的精液灌装方法,最原始的是手动灌装,其次是半自动精液灌装机,最先进的是全自动精液灌装机。

  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第18张
    手动灌装机
  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第19张
    半自动灌装机
  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第20张
    全自动精液灌装机
精液灌装与存储对比
灌装形式分类
第一代第二代第三代
灌装设备要求手动灌装,无需设备自动灌装+手动封口全自动灌装+封口
自动化程度
操作麻烦,产量低操作简易,全自动设备可生产1000剂/小时操作简易,全自动设备可生产1800剂/小时
对精子的影响精子细胞容易堆积,宜侧放,需要频繁转动精子细胞堆积较少,也需要经常转动精子细胞堆积很少,无需经常翻动
运输情况不适合运输适合运输适合运输
适合的用户小型猪场大型猪场或公猪站大型猪场、公猪站和人工授精中心

一般来说,储存的精液袋每天翻转一次,精液瓶每天翻转两次,慢慢转动精液瓶几圈,晃动稀释剂里沉淀的精液细胞。

实验室里主要使用恒温冰箱来储存精液,运输主要使用车载恒温冰箱或车载固定两用恒温冰箱。

  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第21张
    实验室用恒温冰箱
  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第22张
    车载固定两用

精液保存要求

精液需缓慢降温,室温存放1~2h,实验室温度太低可使用纱布包裹。注意冰箱内温度的变化防止温度升高或降低,减少保存箱开关次数,以减少对精子的影响。

每12h将精液摇匀1次,要轻缓均匀,使用前检查活率,活率小于60%的精液应弃之,用稀释液保存的精液,应尽快用完.

人工授精实验室设备的清洗

1、一般清洗

工作结束后,关闭设备电源。用保鲜膜封口剩余的稀释液,放入冰箱保存。用湿毛巾将操作台擦干净。清洗烧杯和玻璃棒,使用专用的清洗剂清洗干净器材,再用蒸馏水清洗两次,最后开口倒置放在毛巾上。

清洗温度计,跟玻璃制品一样冲洗,最后用干燥毛巾擦干。检查所有器材(包括瓶子、盖子等等)。补充第二天实验所需的器材。用酒精擦拭消毒操作台。

2、设备灭菌

如果条件允许,所有的烧杯和玻璃棒都应进行消毒。将清洗过的设备放入灭菌器的架子里。确定灭菌容器内有一定的蒸馏水。打开灭菌设备达到设定温度,灭菌时间20min即可。

将烧杯和玻璃器皿从灭菌器内取出,完全干燥后,放入储存柜里。每两周清理一次灭菌器,并更换容器内的蒸馏水。

人工授精(输精)

发情的检查

母猪发情检查.jpg

判断母猪发情的方法多种多样,无论是哪种方法,都需要配种员有丰富的经验,一般来说母猪的发情周期在21天左右,仔猪断奶后3-7天发情。

母猪的发情周期可分为发情前期、发情期、发情后期,母猪只有在发情期才会出现静力反应,出现这种行为的母猪可以进行输精了。

现在猪场常见的查情方法是使用公猪检查,看看阴道是否红涨有粘液,用手按压母猪,看母猪是否有静立反应。

发情检查表

发情前期发情期发情后期
静立反应按压无静立反应按压背部有静立反应无静立反应
观察阴道阴道红肿阴道粉色,红肿消退灰白色无肿胀
观察粘液粘稠或无粘液粘液多,呈水样粘液消失
行为举止焦躁,食欲减退愿意接受爬跨恢复正常
持续时间1-3天一阶段:公猪反应
8-12小时
允许饲养员爬跨
24-36小时
二阶段:公猪反应
8-12小时
直到下次发情
是否能人工授精

人工受精的方法

人工受精主要有三种方法:子宫颈输精法、子宫内输精法和子宫角输精法,目前最常用的是子宫颈输精法。

  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第24张
  • 猪人工授精最全步骤以及技术要点 养猪知识 第25张

将输精管瓶插入阴道,斜上45°对准子宫颈。待插进30厘米左右,感到有阻力插不进时稍许向外退一点,便可缓慢地注入精液。 输精动作要点:轻插、适深、慢注、轻拔。

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